Extraction et purification des lipides d’un jaune d’œuf.
Q5. Ou se trouve la phase aqueuse (phase inférieure ou supérieure) ? Justifiez votre réponse.
La phase aqueuse se situe en haut dans la burette. Cela s’explique par les différences de densité des deux phases, celle de la phase aqueuse étant environ égale a 1, celle du CH2Cl2 étant de 1,3266 (données du Handbook).
Q6.Quel est le rôle du flux d’azote ?
Le flux d’azote sert a éliminer par évaporation l’acétone qui est un alcool très volatile. Il s’agit d’une réaction endothermique d’où la présence d’un bac d’eau chaude.
Q7. A partir d’une série de schémas, résumer le protocole d’extraction et de purification des lipides du jaune d’œuf.
Q11 Quels sont les phospholipides constitutifs du jaune d’œuf.
Les résultats de la chromatographie B permettent de dire que l’on a dans le jaune d’œuf des PE, mais ne nous permet pas de nous prononcer quant a la présence ou absence des PC et PS. La chromatographie A, utilisant un solvant plus polaire, et donc entraînant mieux les lipides, permet de dire que l’on trouve dans le jaune d’œuf des PC et PE.
Q12.Que vous confirment les Rf que vous venez de déterminer ?
Calculs des facteurs de rétention pour chaque constituant identifié sur la plaque.
Chromatographie A :
F1 → Tache inférieure : 1.8/5.7 = 0.32
Tache médiane : 4/5.7 = 0.7
Tache supérieure : 5.2/5.7 = 0.91 pigments
F2 → Tache inférieure : 1.8/5.7 = 0.32
Tache médiane : 3.9/5.7 = 0.68
Tache supérieur : 5.2/5.7 = 0.91 pigments
PC → 1.9/5.7 = 0.33
PE → 4/5.7 = 0.7
PS → 2.1/5.7 = 0.37
Chromatographie B :
F1 → Tache inférieure : 0.2/5.6 = 0.036
Tache médiane : 0.7/5.6 = 0.125
Tache supérieure : 5.1/5.6 = 0.91 pigments
F2 → Tache inférieure : 0.2/5.6 = 0.036
Tache médiane : 0.8/5.6 = 0.143
Tache supérieure : 5.1/5.6 = 0.91 pigments
PC → 0.2/5.6 = 0.036
PE → 0.7/5.6 = 0.125
PS → 0.1/5.6 = 0.018
Nous allons comparer les Rf de la chromatographie A.
On remarque que le Rf d’un groupe de phospholipides de F1 et F2 sont le même que celui de
la PC (Rf = 0.32 ≈ 0.33) et il en est de même pour les Rf avec la PE (Rf = 0.68 ≈ 0.7).
Cependant ce n’est pas le cas avec le PS. La valeur de son Rf est différente de ceux calculés
en F1 et F2 (Rf = 0.32 ≠ 0.37)
Q14.Quelle phase permet une meilleure séparation des phospholipides ? Pourquoi ?
Après comparaison des deux chromatographie, on peut dire que la phase A (CH2Cl2 / CH3OH
en proportion 65/35) sépare mieux les phospholipides. Il s’agit de la phase la plus polaire, et
donc le solvant interagit mieux avec les têtes hydrophiles des phospholipides provoquant une
meilleure migration sur la plaque de chromatographie.
Q15.Imaginer un protocole pour quantifier les phospholipides.
La PC et PE sont des lipides chargés. Il suffirait de rajouter dans une solution de
phospholipides des molécules chargées qui réagissent a une certaine longueur d’onde. Ceci
nous permettrait de faire une analyse par dosage et spectrophotométrie. On pourrait également
étudier la teneur en phosphate dans une solution de phospholipides.
Q16.Quel est l’intérêt des œufs pour la purification des phospholipides ?
Les œufs sont très utiles dans la purification des phospholipides car on les retrouve en très
grande quantité, ce qui permet de travailler facilement, avec de grandes quantités de matière.
Il y a en effet dans un jaune d’œuf 35% de lipides dont 60% de PC et 30% de PE.
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